NY∕T 1471-2017 牛毛滴虫病诊断技术(农业)
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FC6FE4EA18B946E9AFE46DA867BCFD84 |
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0.55 |
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11 |
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日期： |
2021-12-25 |
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ICS 11 .220,B 41 NY,中华人民共和国农业行业标准,牛毛滴虫病诊断技术,NY/T 1 471 一2017,代替NY/ T 1471- 2007,Diagnostic techniques for bovine trichomoniasis,2017 - 06 - 12 发布2017 - 10 - 01 实施,;②!命中华人民共和国农业部发布,NY/T 1471 一2017,目U 吕,本标准按照GB/ T 1. 1-2009 给出的规则起草,本标准代替NY/ T 1471一2007 (( 牛毛滴虫病诊断技术》。与NY/ T 1471一2007 相比，除编辑性修,改外，主要技术变化如下:,一-病原PCR 检查时增加了一对可用PCR 引物,本标准由农业部兽医局提出,本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/ TC 18 1)归口,本标准起草单位:南京农业大学、中国动物卫生与流行病学中心,本标准主要起草人: 李样瑞、徐立新、严若峰、宋小凯、郑增忍,本标准所代替标准的历次版本发布情况为:,一一-NY/ T 1471-2007 ,I,NY/T 1471 一2017,引,毛滴虫病是由胎儿三毛滴虫(Tritrichomonas f oetus ) 寄生于牛生殖道引起的疾病。该病呈世界性,分布，引起牛，尤其是奶牛生殖器官炎症、死胎、流产和不育，可对畜牧业生产造成严重的经济损失,毛滴虫病被世界动物卫生组织列为通报盖革画.画画.主要通过自然交配传播，已染病动物的精液,和污染的器械人工授精也可引,H,NY/ T 1471-2017,牛毛滴虫病诊断技术,1 范围,本标准规定了牛毛滴虫病的病原显微镜检查技术和聚合酶链反应CPCR) 扩增虫体DNA 的检测,方法,本标准适用于牛毛滴虫病的诊断,2 规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件,GB/ T 6682 分析实验室用水规格和实验方法,GB 19489 实验室生物安全通用要求,3 缩略语,下列缩略语适用于本文件,CT AB: hexadecyltrimethylammonium bromide ，十六烧基三甲基澳化镜,DNA: deoxyribonucleic acid ，脱氧核糖核酸,dNTP: deoxynucleoside triphosphate ， 三磷酸脱氧核昔酸,PBS: phosphate buffer solution ，磷酸盐缓冲液,PCR: polymerase chain reaction ，聚合酶链反应,Tαq 酶: Taq DNA polymerase, Taq DNA 聚合酶,4 生物安全措施,进行牛毛滴虫病实验室检测时，如显微镜检查、DNA 提取等，按照GB 19489 的规定执行,5 临床诊断,5. 1 临床症状,5. 1. 1 公牛,公牛很少或没有临床症状发生。若有症状，主要包括敬液性包皮炎，包皮肿胀，并分泌出大量服性,物质;包皮蒙古膜上出现粟粒大的红色结节，有痛感，不愿交配,5. 1. 2 母牛,母牛出现阴道损伤，卡他性炎症，阴道红肿;黠膜出现粟粒大或更大的小结节，排出蒙古液性分泌物;,宫颈和子宫内膜出现炎症;随后发生不规则的发情，子宫脱垂、子宫积服和早期(1周~16 周)流产,5. 2 结果判定,根据牛交配、人工授精或母牛的生殖系统检查史，公牛具有5 . 1. 1 临床表现、母牛具有5 . 1. 2 临床,表现时，可判定为疑似牛毛滴虫病,6 实验室诊断,6. 1 样品的采集与运输,l,NY/T 1471-2017,6. 2 主要仪,除特别说,显微镜、载,6. 1. 1 样晶的采集,6. 1. 1. 1 母牛,选择发情后1 d ~2 d 的母牛，用水将母牛外生殖器洗涤干净。然后，采用下列任何一种方法采样:,a) 取市场上出售的常规型号的注射器，如50 mL 、1 00 mL 的注射器，将3 0 mL ~40 mL 的3 00C~,35 0C灭菌生理盐水急速注入阴道，以洗涤子宫和阴道壁。收集洗涤液于离心管中,1 500 r/ min~2 000 r/ min 离心5 min 后，取沉淀物作为待检样品,b) 取一长30 cm 、直径0 . 9 cm ，并在离→端9cm 处弯成1 5 0。角的消毒玻璃管，注人1 mL ~2 mL,的30 0C~35 0C 灭菌生理盐水,6. 1. 1.2 公牛,首先将公牛外生,后，以手压紧包皮口,2000 r/ min离心5,6. 1. 1.3 精液,取人工采集,体,聚合酶、1 X PCR,研件、捣碎机、抗有,始叫和,凹t 钵,的动研,口制陈,H,F,拣匀,6. 3. 1 压滴标本检查法,将采集的待检样品l,速进行检查。可重复进行2 片~ 3,6. 3. 2 染色标本检查法,将采集的待检样品少量置于载玻片一端， 立即推制成均匀的薄膜。在室温下干燥，后用甲醇固定,2 min 。将固定的抹片浸人足量的姬姆萨染色稀释液的染色皿中，染色0 . 5 h~ lh ，取出水洗，吸干或烘,干后镜检,6. 3. 3 结果判定,在显微镜下观察，胎儿三毛滴虫的形态特征参见附录B 。两种方法只要有一种方法观察到胎儿三,毛滴虫即判为病原镜检阳性，未观察到胎儿三毛滴虫判为病原镜检阴性,显微镜下，视野放暗，迅,6.4 病原PCR 检查,6. 4. 1 PCR 引物,NY/T 1471-2017,可采用引物TFR1 / TFR2 和TFR3/ TFR4 中任何一对用于……
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